ČSN ISO 15213

Tato česká norma specifikuje horizontální metodu stanovení počtu bakterií redukujících sulfity za anaerobních podmínek růstu. Platí pro výrobky určené pro lidskou výživu a ke krmení zvířat a vzorky z prostředí potravinářských výroben a prodejen. Ke stanovení jejich počtu se používá technika počítání kolonií a jako selektivně diagnostická půda agar se železem a siřičitanem. Tímto agarem se inokulum v Petriho miskách zalévá, druhá možnost je použití zkumavek s tímto agarem, kam se inokulum přenese a s půdou se smísí. V obou případech se po inokulaci nalévá ještě horní vrstva téhož agaru. Takto naočkované plotny se inkubují v anaerostatu při 37 °C ± 1 °C po dobu 24 h až 48 h (konečné hodnocení se provádí po 48 h) nebo při 50 °C ± 1 °C, pokud je podezření na přítomnost termofilních bakterií redukujících sulfity. V případě zkumavek není inkubace v anaerostatu nutná. Tyto bakterie produkují enzym sulfitreduktázu. Proto redukují v selektivně diagnostické půdě přítomné siřičitany (sulfity) charakterizované aniontem (SO3)2- na sulfidy charakterizované aniontem (S)2-. Ten pak reaguje se železem přítomným v půdě za vzniku černého sulfidu železnatého (FeS). Jako kolonie bakterií redukujících sulfity za anaerobních podmínek růstu se počítají typické černě zbarvené kolonie. Příslušnost izolátů k rodu Clostridium se potvrdí konfirmačními testy. Je možné použít záhřev výchozí suspenze k eliminaci vegetativních forem. To se používá v případě termofilních bakterií redukujících sulfity za anaerobních podmínek růstu a výsledky se pak interpretují jako počet jejich spór.